色譜法的分離原理是：溶于流動相( phase)中的各組分經過固定相時，由于與固定相(stationary phase)發生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。
液相色譜法的特點和優點
HPLC有以下特點：
高壓——壓力可達150~300 Kg/cm2。色譜柱每米降壓為75 Kg/cm2以上。
高速——流速為0.1~10.0 ml/min。
——可達5000塔板每米。在一根柱中同時分離成份可達100種。
高靈敏度——紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。
HPLC與經典液相色譜相比有以下優點：
速度快——通常分析一個樣品在15~30 min，有些樣品甚至在5 min內即可完成。
分辨率高——可選擇固定相和流動相以達到*分離效果。
靈敏度高——紫外檢測器可達0.01ng，熒光和電化學檢測器可達0.1pg。
柱子可反復使用——用一根色譜柱可分離不同的化合物。
樣品量少，容易回收——樣品經過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。
液相色譜法對流動相的基本要求是：
①與固定相不互溶，不發生化學反應。
②對樣品有適宜的溶解度，要求k值在1～10范圍內（可用范圍）或2～5（*范圍）。溶解度太大，k值太小，不利于分離；溶解度太小，k值太大，可能使樣品在流動相中產生沉淀。
③必須與檢測器相適應。例如用紫外檢測器，流動相本身在檢測波長處應無吸收。
④流動相的粘度要小，可以降低色譜柱的阻力而提高柱效。
⑤純度高，不含機械雜質。
在HPLC中影響因素很多，流動相只是其中一個很重要的部分，要運用好液相色譜法還需考慮其他各個方面的因素。
|
|
|
|
|
 |
